Rendimiento de diferentes métodos de PCR en el diagnóstico molecular de las rickettsiosis humanas transmitidas por garrapatas

Résumé

Las rickettsiosis constituyen un grupo heterogéneo de zoonosis, transmitidas por artrópodos vectores (garrapatas, pulgas, piojos y otros ácaros) y producidas por distintas especies del género Rickettsia. El diagnóstico de este tipo de infecciones es fundamentalmente clínico, si bien hacen falta pruebas confirmatorias de laboratorio. El cultivo celular, las técnicas serológicas y la amplificación mediante PCR de diversos fragmentos de genes rickettsiales constituyen los métodos de diagnóstico microbiológico más utilizados. Hasta la fecha no se ha evaluado la eficiencia de ensayos de PCR que amplifican ADN de Rickettsia spp. en muestras clínicas. Nuestro objetivo fue determinar la sensibilidad y la utilidad para la identificación de especies de rickettsia de métodos de PCR que amplifican los genes ADNr 16S, htrA, gltA, ompA y ompB para el diagnóstico molecular de rickettsiosis. Para ello estudiamos 72 muestras (sangre con EDTA, biopsias de piel y garrapatas) de 52 pacientes con rickettsiosis en fase aguda y confimada por PCR. Se realizaron PCRs sencillas [ADNr 16S, gltA (extremo 5'), y htrA] y secuenciales (anidadas o semianidadas) [ompB, gltA (región central) y ompA]. La mayor sensibilidad con PCRs sencillas se obtuvo para gltA (extremo5'). En PCRs secuenciales, los resultados más sensibles se lograron utilizando ompB (83.3%). La mayor sensibilidad (100%) se obtuvo tras realizar tres PCRs secuenciales. De acuerdo a las características clínicas, la PCR de ompA fue la más útil para identificación de especies de rickettsia. Como conclusiones de este trabajo se puede decir que: los métodos de PCR son válidos para el diagnóstico de rickettiosis en fase aguda. Los tres ensayos de PCR secuenciales aquí estudiados (ompB, gltA y ompA) son herramientas útiles para el diagnóstico molecular de rickettiosis. La PCR de ompB es efectiva para un primer cribado, permitiendo detectar un alto porcentaje de muestras positivas. La PCR del gen ompA es la más fiable para implicar una especie de rickettsia en patología humana. No obstante, la epidemiología, los síntomas clínicos y el vector deben ser valorados para el diagnóstico de rickettsiosis.