Detección de mutaciones en genes oncosupresores mediante PCR-SSCP

  1. Gómez Gómez, Mª Lourdes
Supervised by:
  1. Javier Sáez Director

Defence university: Universidad Autónoma de Madrid

Fecha de defensa: 27 May 1994

Committee:
  1. Manuel Gonzalez Barón Chair
  2. José Schneider Fontán Committee member
  3. Angel Pestaña Vargas Committee member
  4. Carlos Barrios Pitarque Committee member

Type: Thesis

Teseo: 45094 DIALNET

Abstract

EL P53 ES EL GEN MAS FRECUENTEMENTE MUTADO EN CANCER HUMANO. RECIENTEMENTE SE HA INTRODUCIDO UNA NUEVA TECNICA DE DETECCION DE MUTACIONES, EL SSCP (SINGLE STRAND CONFORMATION POLYMORPHISM) BASADA EN LA UTILIZACION PREVIA DE PCR (POLYMERASE CHAIN REACTION) PARA AMPLIFICAR LA PORCION DE DNA A ESTUDIAR. LA MIGRACION DE LAS CADENAS SIMPLES DE DNA EN GELES DE POLIACRILAMIDA NO DESNATURALIZANTES SERA DIFERENTE DEPENDIENDO DE LA ESTRUCTURA SECUNDARIA DE LAS MISMAS, POR LO QUE CUALQUIER CAMBIO EN LA SECUENCIA DE NUCLEOTIDOS PRODUCIRA UN PATRON DE BANDAS ALTERADO. PARA ESTUDIAR LA SENSIBILIDAD DE ESTA TECNICA EN NUESTRAS MANOS, AMPLIFICAMOS LOS EXONES 5 A 8 DEL P53 EN 48 SARCOMAS, OBTENIENDO PATRONES SSCP-POSITIVOS EN 9 TUMORES, Y COMPARAMOS ESTOS RESULTADOS CON LOS DE SECUENCIACION. LA EXISTENCIA DE CORRELACION POSITIVA ENTRE AMBOS CONFIRMO LA SENSIBILIDAD DEL SSCP. AL COMPARAR EL SSCP CON LA INMUNOHISTOQUIMICA, EN TUMORES GINECOLOGICOS, CONCLUIMOS QUE PARA REALIZAR UN ESTUDIO DE MUTACIONES DEL P53 EN CARCINOMAS DE CERVIX, DE FORMA FIABLE, ES IMPERATIVO EL USO DEL SSCP, PUES NO EXISTE CORRELACION ENTRE LA INMUNOHISTOQUIMICA Y EL SSCP EN CARCINOMAS DE CERVIX, A DIFERENCIA DE LOS CARCINOMAS DE MAMA Y ENDOMETRIO, EN LOS QUE LA CORRELACION ENTRE AMBAS TECNICAS ES BUENA. ADEMAS DETECTAMOS MUTACIONES DEL P53 EN 7 DE 17 CARCINOMAS DE MAMA, 4 DE 11 CARCINOMAS DE ENDOMETRIO, 2 DE 8 CARCINOMAS DE CERVIX, 6 DE 11 HEPATOCARCINOMAS, Y 6 DE 17 CARCINOMAS DE PULMON. UNA VEZ COMPROBADO QUE, EN NUESTRAS MANOS, LA TECNICA ES FIABLE, SENSIBLE Y REPRODUCIBLE, ESTUDIAMOS LA POSIBLE INACTIVACION DE LOS GENES DE SUSCEPTIBILIDAD A NEUROFIBROMATOSIS (NF1 Y NF2) EN CANCER HUMANO. SI BIEN EL GEN NF1 SOLO MOSTRO UNA MUTACION, EN UN MELANOMA, DE UN TOTAL DE 182 TUMORES DE VARIOS TIPOS HISTOLOGICOS, NO SE DETECTARON MUTACIONES DEL GEN NF2 EN 15 CARCINOMAS DE MAMA.