Efecto del peroxinitrito en el tráfico de l-arginina entre astrocitos y neuronas en cultivo primario

Zusammenfassung

En cerebro, la arginina se localiza predominantemente en astrocitos, mientras que la concentración en neuronas es muy baja, siendo limitante para la actividad de la oxido nítrico sintasa neuronal (nNOS). A continuación subóptimas de arginina se generan anión superóxido y óxido nítrico por la NOS. Ambos radicales libres reaccionan rápidamente originando anión peroxinitrito (ONOO), un compuesto inestable, tóxico para neuronas pero no para astrocitos. Nosotros pensamos que el ONOO puede tener un papel fisiológico doble actuando como señal moduladora que facilita la liberación de arginina por los astrocitos y además previniendo la formación de ONOO en neuronas tras la activación de la nNOs. Por ello, estudiamos la regulación del transporte de L-(3H)arginina tras un aporte exógeno o endógeno de peroxinitrito en células gliales. La liberación de L-arginina mediada por peroxinitrito aumentó dos veces en C6 de forma sodio-independiente. Este incremento se previno por 5mM de L-arginina en ausencia de sodio y por 5 mM de L-alanina o L-leucina en presencia de sodio. El aumento en la captación de L-arginina mediada por peroxinitrito fue transestimulada por 10 mM de L-arginina e inhibida de manera concentración dependiente por el inhibidor del sistema y+, la N-etilmaleimida, en C6. El peroxinitrito formado endógenamente en astrocitos tratados con LPS, aumentó el transporte de L-arginina sin alterar los niveles del RNA del Cat-1. Análisis de Western Blot de astrocitos y C6 tratadas con ONOO revelaron una banda 3-nitrotirosinada anti-Cat1-inmunopositiva, surgiriendo fuertemente la nitración del transportador Cat1 como causa de su activación. Además, el ONOO no alteró el transporte de L-arginina en fibroblastos carentes (homozigóticos) del gen que codifica para Cat1. Por último, L-arginina liberada por astrocitos tratados con ONOO-, fué eficazmente captada por las neuronas en sistemas de cocultivos. Todos estos res