Estudios sobre la biosintesis del b(1,3) glucano de la pared celular de schizosaccharomyces pombe

Zusammenfassung

Se han obtenido mutantes resistentes a los antifungicos papulacandina b o aculeacina a. De su analisis genetico se concluye que son mutaciones mendelianas recesivas, que pertenecen a un unico grupo de complementacion y estan intimamente ligadas entre si. La actividad b(1,3) glucan sintasa de las estirpes pap 1 y-o acu 1 presenta caracteristicas cineticas similares a la de la estirpe silvestre, pero la ki es considerablemente mayor en los mutantes, residiendo la resistencia en la fraccion catalitica del enzima. Se ha caracterizado la mutacion sph 1, que es mendeliana, recesiva e intimamente ligada a pap 1 y acu 1. Esta mutacion produce alteraciones estructurales en la pared celular debidas a una disminucion especifica del 70% del galactomanano, que afecta por igual a la proteina y al carbohidrato de la molecula, y que no es debida a una menor actividad manan sintasa, sino a una deficiencia en el anclaje de la molecula dentro de la pared. La mutacion cwg 1 es nuclear, monogenica, recesiva, termosensible y produce a la temperatura restrictiva un fenotipo litico similar al producido por papulacandina b. La actividad b(1,3) glucansintasa se encuentra disminuida, pero la estabilidad frente a la temperatura es similar a la del enzima silvestre, por lo que la mutacion no afecta al gen estructural, sino a otro gen relacionado con el enzima. Se ha clonado el gen swg 1+, supresor de cwg 1, pero no de pap 1 y sph 1. La supresion depende del grado de expresion del gen dentro de la celula. La interrupcion genica de swg 1+ demuestra que se trata de un gen dispensable para la celula. Se ha conseguido solubilizar un componente de la actividad b(1,3) glucan sintasa mediante el empleo de detergentes y clna. El componente soluble es de naturaleza proteica, termolabil y responsable de la union del gtp al enzima. Los intentos de purificacion, realizados mediante el sistema fplc y otros metodos convencionales, han sido satisfactorios.