Papel de fast (fas-activated serine threonine phosphoprotein) en la fagocitosis de las bacterias por parte de los macrófagos

Abstract

Esta Tesis Doctoral estudia los efectos de la ausencia de FAST (Fas-activated serine threonine phosphoprotein) en la capacidad fagocítica de los macrófagos en animales de experimentación y humanos. Recientemente, se ha avanzado mucho en la comprensión de las bases moleculares y funciones celulares de FAST y sus homólogos. La generación de ratones deficientes en FAST (knockout, KO) nos ha permitido descubrir la importancia de esta proteína en la regulación de diversos aspectos de la respuesta inmune. En un modelo de daño pulmonar agudo por lipopolisacáridos, los ratones que carecían de FAST mostraron una reducción en la infiltración de neutrófilos y las concentraciones de citocinas y quimiocinas en el lavado broncoalveolar. El análisis de quimeras de médula ósea sugería que las células responsables del fenotipo eran células residentes en pulmón de origen hematopoyético. Nuestros estudios posteriores demostraron que la población macrofágica alveolar de los ratones FAST KO participaba en el fenotipo inflamatorio de los mismos. El propósito del presente estudio fue explorar los efectos de la deficiencia de FAST en otros aspectos del sistema inmune innato, particularmente en algunas funciones macrofágicas tales como fagocitosis y muerte intracelular de bacterias gram positivas y gram negativas. Nuestros resultados muestran que los macrófagos deficientes en FAST tienen una capacidad aumentada de fagocitar bacterias Escherichia coli en ensayos in vitro e in vivo. Los macrófagos KO también presentaron un ligero aumento de la fagocitosis de Staphylococcus aureus pero no resultó ser significativo. La evaluación de la expresión de los receptores TLR2 y TLR4 y de diferentes marcadores de maduración no reveló diferencias significativas entre macrófagos de ratones wild type (WT) y ratones KO. Finalmente, ambos grupos de macrófagos presentaron una capacidad similar de matar bacterias y de producir especies reactivas de oxígeno. Los conteos bacterianos a tiempos iniciales en el ensayo de protección con gentamicina se correlacionaron con los índices fagocíticos. Finalmente, demostramos que los macrófagos derivados de la línea monocítica humana THP-1 en los que se silenció la expresión de FAST mediante RNA de interferencia también presentó una capacidad aumentada de fagocitar bacterias Escherichia coli. En conclusión, nuestros resultados revelan un nuevo papel de FAST en la regulación de la fagocitosis.