Optimización de los cultivos de epitelio limbar humano para su posterior trasplante a la superficie ocular / optimization of human limbal epithelial cultures for clinical transplantation

Résumé

La continua regeneración del epitelio de la córnea es llevada a cabo por las células madre epiteliales limbares (CMEL) localizadas en el limbo esclerocorneal. La disfunción de estas células y/o del ambiente que las rodea produce un cuadro clínico conocido como síndrome de insuficiencia límbica (SIL), cuyas principales secuelas son ceguera corneal, dolor crónico y disminución notable de la calidad de vida. El trasplante de CMEL expandidas in vitro es, actualmente, el tratamiento de elección para estos pacientes. Esta terapia consiste en aislar células epiteliales limbares (entre las que se encuentran las CMEL) de un nicho sano, cultivarlas in vitro sobre un soporte originando un cultivo primario de limbo y, finalmente, trasplantar el complejo soporte-células a la superficie ocular dañada. Sin embargo, a pesar de representar este tratamiento uno de los primeros y más claros éxitos de la medicina regenerativa, presenta diferentes limitaciones, como la baja disponibilidad de donantes de tejidos oculares, el uso de compuestos potencialmente nocivos para el uso en humanos y, en ocasiones, la baja presencia de células madre en los cultivos primarios. En este contexto, la finalidad última de este trabajo es optimizar los protocolos utilizados actualmente para el cultivo in vitro de CMEL. Para abordar estas limitaciones, por un lado, se ha desarrollado un protocolo que permite establecer hasta tres cultivos primarios similares entre sí a partir de la misma biopsia limbar, aumentando de esta forma el número de cultivos primarios limbares disponibles a partir de una pequeña cantidad de tejido donante. Por otro lado, se ha diseñado un medio de cultivo carente de componentes de origen animal y/o de compuestos potencialmente nocivos que permite obtener cultivos primarios de limbo, mejorando la bioseguridad de los mismos. Y, finalmente, se ha determinado que las células epiteliales del tejido limbar aisladas mediante la técnica de suspensiones celulares permiten establecer cultivos primarios con un número más elevado de CMEL que cuando el aislamiento celular se realiza mediante la técnica de explantes. De esta forma, se ha demostrado que es posible optimizar las técnicas utilizadas actualmente para el cultivo in vitro de las CMEL. La transferencia de estos resultados a la práctica clínica habitual podría mejorar la calidad y la bioseguridad de los trasplantes de CMEL cultivadas in vitro y, por tanto, la eficacia de los mismos para reconstruir la superficie ocular afectada por el síndrome de insuficiencia límbica.