Dinámica de calcio en vesículas de secreción de células neuroendocrinas

  1. Santo Domingo Mayoral, Jaime
Supervised by:
  1. Javier Álvarez Martín Director
  2. Alfredo Moreno Co-director

Defence university: Universidad de Valladolid

Fecha de defensa: 19 May 2008

Committee:
  1. Ricardo Rigual Bonastre Chair
  2. Fonteriz Garcia Rosalba Ines Secretary
  3. Manuela García López Committee member
  4. Ricardo Borges Jurado Committee member
  5. María Almudena Albillos Martínez Committee member
Department:
  1. Biochemistry and Molecular Biology and Physiology

Type: Thesis

Teseo: 146470 DIALNET

Abstract

Los granulos de secreción constituyen uno de los depósitos intracelulares de calcio menos conocidos, desde hace más de 20 años sabemos que contienen grandes cantidades de calcio total (unido más libre), sin embargo hasta la fecha existe cierta discusión acerca de cual es la concentración de calcio libre en el interior (la mayor parte debe de encontrarse unido a un gran buffer interno formado fundamentalmente por proteínas). Además los mecanismos moleculares que controlan tanto la captación como la liberación de calcio son poco conocidos y podrían ser distintos en diferentes tipos celulares. En definitiva, el significado fisiológico del calcio intragranular es todavía poco conocido. Nosotros hemos utilizado una aequorina quimérica, producto de la fusión de una aequorina mutada (de baja afinidad por calcio) y la proteína VAMP2 o sinaptobrevina, para monitorizar la dinámica de calcio en el interior de los gránulos de secreción de diferentes tipos celulares neuroendocrinos (células cromafines bovinas, células PC12 y células INS1). La concentración de calcio libre en condiciones basales en el interior de las vesículas de secreción de celulas cromafines bovinas, teniendo en cuenta un pH intraluminal de 5,5, se sitúa entre 50 y 100 micromolar, y entre 20 y 40 micromolar en las líneas celulares PC12 e INS1. En cuanto a los mecanismos de acumulación de calcio en las vesículas de secreción, la exploración farmacológica llevada a cabo con diferentes inhibidores de ATPasas de calcio (tapsigargina , BHQ y ácido ciclopiazónico) sugiere la presencia de ATPasas de calcio de tipo SERCA en la membrana de las vesículas de secreción. Por otro lado la disminución en los niveles de calcio intravesiculares en presencia del inhibidor de la ATPasa de protones vacuolar, bafilomicina y agentes que colapsan el gradiente de protones, como el FCCP y el cloruro amonico, sugiere la existencia de un intercambiador Ca+/H+ que opera a expensas del gradiente de