Regulación de la expresion de la óxido nítrico sintasa inducible por receptores de rna de doble cadena en macrófagos

Resumen

El RNA de doble cadena es un producto de la replicación viral capaz de inducir una respuesta inflamatoria cuando es reconocida por las células fagocíticas. En este proyecto de tesis se estudiará la fosfolipasa A2 citosólica del grupo IVA (cPLA2¿) como un efector de la respuesta antiviral de los macrófagos. El tratamiento de la línea celular macrofágica murina RAW 264.7 con ácido poliinosínico-policitidílico (Poly I-C, un análogo de RNA de doble cadena) promueve la liberación de acido araquidónico (AA) que es convertido en prostaglandina E2 (PGE2) por la enzima ciclooxigenasa-2 (COX-2). Estos procesos son bloqueados por Pyrrofenona, inhibidor selectivo de la cPLA2¿, señalando a esta enzima como el efector implicado. De acuerdo con estas observaciones, el estado de fosforilación de la cPLA2¿ aumenta después del tratamiento celular con Poly I-C. La inhibición de la expresión y la actividad de la cPLA2¿, bien por siRNA o por Pyrrofenona, conduce a la inhibición de la expresión del gen de la óxido nítrico sintasa inducible (iNOS). Además la producción de PGE-2 derivada de COX-2 parece participar en la expresión de iNOS, ya que la inhibición de la expresión de COX-2 por RNA de interferencia también conduce a la inhibición de la expresión de iNOS y este efecto es restaurado con la adición exógena de PGE2. Finalmente la eliminación de Toll-like receptor 3 (TLR3) por siRNA, inhibe la expresión de COX-2, la generación de PGE2 y la inducción de iNOS por Poly I-C. Colectivamente, estos hallazgos sugerirían un modelo durante la activación del macrófago en respuesta a RNA de doble cadena, en el que el reconocimiento de esta molécula por el receptor TLR3 lleva a la movilización de AA mediada por cPLA2¿ y la producción de PGE2 mediada por COX-2, que cooperan para inducir la expresión de iNOS.