Superficie conjuntival humana in vitrodesarrollo, caracterizacion y validacion

Resumen

Debido a la importancia de la conjuntiva dentro de la fisiologia ocular y a la escasez de sistemas in vitro de estudio, tanto de origen humano como de origen no humano, se planteo la siguiente hipotesis de trabajo: es posible desarrollar un sistema in vitro de epitelio conjuntival humano, sin contaminacion por otros tipos celulares, que sirva de soporte valido para profundizar en el estudio de la fisiopatologia conjuntival. Se marcaron tres objetivos. 1) desarrollar un sistema in vitro de epitelio conjuntival humano. 2) caracterizar este sistema desde dos puntos de vista: morfologico y no morfologico, analizando la expresion de marcadores funcionales. 3) validar el sistema desarrollado mediante la realizacion de dos estudios: uno de eficacia farmacologica y otro de toxicidad. Se emplearon para ello diversas tecnicas: cultivos primarios, microscopia optica, microscopia electronica de transmision y de barrido, inmunocitoquimica, incubacion con farmacos y test de toxicidad. Los tres objetivos se cumplieron ya que 1) se logro desarrollar un sistema in vitro de epitelio conjuntival humano, con un alto grado de similitud con el epitelio de la conjuntiva humana puesto que mantuvo las caracteristicas de epitelio multiestratificado y de diferenciacion conjuntival. 2) el sistema demostro ser valido para realizar estudios in vitro de eficacia farmacologica aportando, asimismo, datos que indican una participacion de la celula epitelial conjuntival en los procesos inmunes de la superficie ocular mayor de lo que se pensaba. 3) tambien demostro ser util para la realizacion de estudios de toxicidad, sin sustituir a las lineas celulares establecidas pero como sistema de apoyo, por su mayor proximidad a la realidad biologica del tejido de origen. Finalmente, este trabajo aporta las primeras bases para pensar que, continuando con las lineas de trabajo que ha abierto, el trasplante de conjuntiva in vitro puede ser una realidad futura.