Análisis lipidómico de los cambios en el metabolismo lipídico que tienen lugar durante la activación de los macrófagos peritoneales de ratón por estímulos proinflamatorios

Resumen

Los macrófagos han sido estudiados como una de las principales fuentes de AA libre y de eicosanoides. En presencia de un estímulo inflamatorio, el AA contenido en los fosfolípidos de membrana se hidroliza para liberarse y posteriormente metabolizarse a sus derivados oxigenados, los cuales desempeñan funciones biológicas. En este trabajo se estudia la movilización del AA y AdA de los fosfolípidos ante zimosan y su homólogo opsonizado y que papel toman diferentes fosfolipasas en la hidrolisis y liberación de dicho ácido graso n-6. Los resultados indican que el AA y AdA se localiza prioritariamente en las especies de PE, mayoritariamente en plasmalógenos, aunque una elevada cantidad se localiza también en PC y PI. En presencia de zimosan, los macrófagos experimentan disminuciones en estos dos últimos fosfolípidos, sin grandes variaciones en PE. Sin embargo, la liberación de AA y AdA es mayor en presencia de zimosan opsonizado. Además, en los experimentos se emplearon inhibidores selectivos de las fosfolipasas sPLA2-V, cPLA2α e iPLA2β observando el gran papel que desempeña la cPLA2α en la hidrolisis y posterior liberación del AA, mientras que en la movilización del AdA participan tanto la cPLA2α y la iPLA2β. En este estudio se ha analizado cómo, en presencia de AdA exógeno, los macrófagos utilizan el AA de la misma manera que cuando estos no son enriquecidos con AdA, por lo tanto, dichos ácidos grasos no compiten entre sí en condiciones inflamatorias. Por otra parte, también se ha analizado la razón de la falta de movilización de AA de las especies de PE. Datos reportados en la bibliografía han descrito la falta de movilización de dicho ácido graso como una continua reincorporación de este en las especies de PE gracias a CoA-IT. Sin embargo, en este estudio se observa como, aunque en presencia de zimosan no hay una aparente liberación en PE a causa de la remodelación, si que se observan disminuciones en los niveles en presencia de zimosan opsonizado. Gracias a estudios hechos a partir de marcaje con [3H]AA se ha comprobado que la remodelación en presencia de zimosan opsonizado es más lenta y la tasa de remodelación es menor que la analizada con zimosan sin opsonizar. Estos resultados explican la rápida recuperación de PE con AA en presencia de zimosan a diferencia de su homólogo opsonizado. Debido a la gran implicación reportada en bibliografía de los fosfolípidos oxidados ante situaciones inflamatorias, se realiza un análisis detallado de la presencia de estos en macrófagos peritoneales murinos. Para su detección se han empleado técnicas con gran sensibilidad y reproducibilidad como es la cromatografía acoplada a la espectrometría de masas. Los resultados indican un aumento de los niveles de fosfolípidos oxidados bajo condiciones inflamatorias. La hidrólisis y liberación de estos compuestos es de gran importancia en situaciones inflamatorias, describiéndose la gran implicación de la iPLA2β ya que, como se ha podido comprobar, su inhibición impide la liberación de AAox. Sin embargo, se ha observado como la cPLA2α también participa de forma parcial en la síntesis de fosfolípidos oxidados, hidrolizando y liberando AA que posteriormente es oxidado a través de la vía enzimática LOX. Finalmente, se realizó un estudio lipidómico de los fosfolípidos presentes en macrófagos peritoneales polarizados a M1 y M2 con el fin de encontrar diferencias entre ambos fenotipos, tanto en su forma basal como estimulados. Si bien no se encontraron diferencias entre ambas polarizaciones y las células control en cuanto a la liberación de AA en condiciones inflamatorias, la liberación de ácidos grasos como AdA, DHA, DPA y EPA en células activadas, fue diferente en ambos fenotipos, observando menor liberación y por ende, mayor acumulación en el fenotipo M1.