Clonación y caracterización de genes de proteínas inactivadoras de ribosomas y lectinas de las especies sambucus nigra l.Y muscari aremeniacum (l.) miller

Abstract

Esta tesis describe la clonación molecular de varias RIPs("ribosome-inactivating proteins") y lectinas presentes en Sambucus nigra L. Y Muscari armeniacum L. Miller, utilizando la técnica denominada RACe ("Rapid Amplification of cDNA Ends"). El saúco (S. Nigra) posee un gran número de RIPs en diversos tejidos, tanto de tipo 1 como de tipo 2, así como numerosas lectinas. Con este trabajo se ha conseguido la clonación de la nigrina 1,RIP de tipo 2 no tóxica presente en las hojas de la planta, asi como de dos lectinas del mismo tejido, una monomérica(SNALm) y otra dimérica(SNALd). Esta última es la primera lectina dimérica aislada en el genero Sambucus. El gen de la nigrina 1 incluye la secuencia de un péptido señal y de un péptido de conexión entre sus dos cadenas constituyentes, que son procesados en la maduración de la proteína. Posee una alta homología con el gen de la RIP de tipo 2 de corteza nigrina b. Los genes de las lectinas incluyen secuencias equivalente al péptidos señal, parte de la cadena A y péptido de conexión de una RIP de tipo 2, que se procesan para rendir las proteínas maduras. Este hecho, junto con la elevada homología que presentan con la cadena B de la nigrina 1, hace pensar en un posible origen común de todos estos genes. Así mismo, se han obtenido los cDNAs correspondientes a cuatro RIPs de tipo 1 presentes en los bulbos de la especie Muscari armeniacum L. Miller, llamadas musarminas, asi como a otra musarmina presente en las hojas. Por comparación con el tamaño de las proteínas nativas se deduce la posibilidad del procesamiento de un péptido(péptido señal) en N-terminal asi como en el extremo C-terminal. Posteriormente se llevó a cabo la expresión en Escherichia coli de uno de los genes de musarminas de bulbo y la puesta a punto de la purificación de la proteína recombinante. Esta proteína tambien ha sido caracterizada, comprobándose que presenta la misma actividad enzimátic