El enzima de conversion de angiotensina i en avesaislamiento por cromatografia de afinidad y su caracterizacion

Resumen

Se ha realizado un amplio estudio sobre el enzima de conversion de angiotensina (ace) en aves. Los resultados que en ella se expresan responden a tres directrices fundamentales: 1. Estudio sobre la distribucion de la actividad del ace en diferentes organos de pollo. 2. Desarrollo de un sistema de cromatografia de afinidad especifico para el aislamiento del ace de ave. Como ligando se ha utilizado un inhibidor del ace, el 2-d-metil-3-mercaptopropanoil-l-prolina o captopril, que fue inmovilizado en el gel, sepharosa 4b, a traves de un brazo espaciador de seis atomos de carbono. La capacidad de la matriz de afinidad resultante fue de 5 moles de captopril acoplado por ml de gel. 3. Purificacion del ace de pulmon de pollo hasta homogeneidad electroforetica. Se ha elaborado un protocolo de purificacion en dos etapas: en la primera se realizo la extraccion del ace particulado por dos procedimientos distintos que fueron digestion con tripsina y solubilizacion con detergente, en la segunda se incluyo un paso de cromatografia de afinidad como principal etapa de purificacion. El factor de purificacion para el enzima triptico (ace-tp) fue de 320 veces y un rendimiento de un 28%, para el enzima solubilizado con detergente (ace-dt) fue de 252 veces y un rendimiento de un 45%. Realizada la caracterizacion molecular y estudios cineticos de ambas formas del enzima encontramos para el ace-tp un peso molecular de 270000 d. Y punto isoelectrico de 4,7 mientras que para el ace-dt encontramos un peso molecular de 690000 d. Ypunto isoelectrico de 5,2, indicando que la secuencia polipeptidica unida a la membrana contribuye en gran medida en el tamaño y en la carga del ezima. Los parametros cineticos determinados con sustrato artificial, hip-his-leu, y con un sustrato natural, angiotensina i, revela que ambas formas del enzima muestran mayor afinidad por su sustrato natural y ademas el ace-dt muestra mayor afinidad hacia sus sustratos que el ace-t