Vectorización de fármacos para la optimización del tratamiento de enfermedades inflamatorias intestinales

Resumen

El término enfermedad inflamatoria intestinal (EII) engloba dos trastornos idiopáticos, la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa. Los fármacos más eficaces en el tratamiento de las EII son los corticoides, destacando la prednisolona, que ha demostrado mayor eficacia. Sin embargo, su uso se limita a los casos graves debido a la aparición de efectos secundarios como consecuencia de su absorción sistémica. El objetivo principal de esta tesis consiste en desarrollar sistemas de liberación modificada de prednisolona vectorizados con lectina SELfd conforme a los condicionantes biofarmacéuticos de las EII. Para ello, se procedió al aislamiento y caracterización de SELfd, seguido del estudio de sus propiedades bioadhesivas sobre tejido intestinal de ratón. Para mejorar la vehiculización de prednisolona se elaboraron micropartículas empleando como polímeros el PLGA y el quitosano, y se funcionalizaron los sistemas con SELfd. Por último, se evaluó la formulación seleccionada en el modelo murino de daño-regeneración generado por ebulina f. La SELfd fue aislada conforme a la metodología propuesta por el equipo del profesor Girbés de la universidad de Valladolid, a partir de muestras vegetales y posterior purificación por cromatografía afinidad y de exclusión molecular. Para evaluar la viabilidad de la SELfd purificada se realizaron ensayos de hemoaglutinación, comprobando que tras su congelación la proteína permanece activa. Para estudiar la biodistribución y las propiedades bioadhesivas de la SELfd se marcó radiactivamente con 68Ga. Se observó una mayor captación del complejo en intestino, bazo, estómago e hígado, respectivamente, es decir, principalmente en órganos del aparato digestivo. Los estudios de microscopía de campo claro y microscopía confocal sobre secciones histológicas de intestino delgado muestran que la SELfd se une de manera inespecífica a los enterocitos de la superficie del epitelio intestinal. También se observó un acúmulo de lectina sobre las células madre secundarias, células del segmento TAC y células de Paneth. A partir de estos resultados se elaboraron micropartículas de prednisolona empleando como polímeros el PLGA y el quitosano. Las formulaciones elaboradas con PLGA mostraron una elevada dispersión de tamaños y una baja eficacia de encapsulación. En las formulaciones elaboradas con quitosano, empleando como variables de formulación la concentración del agente entrecruzante (TPP) y el pH de la solución, se logró una elevada eficacia de encapsulación y un adecuado perfil de liberación con sistemas de tamaño medio en torno a 5 micrómetros. Para mejorar las propiedades farmacotécnicas de vectorización, la formulación se funcionalizó con SELfd. Tras la fijación a las micropartículas se comprobó la viabilidad de las proteínas mediante los estudios de hemoaglutinación, demostrando que, una vez unida a las partículas, la proteína seguía siendo activa. Por último, los resultados de los estudios de microscopía de campo claro y microscopía confocal sobre secciones histológicas de aparato digestivo dañado conforme al modelo de daño-regeneración, han demostrado que las micropartículas funcionalizadas con SELfd son capaces de unirse inespecíficamente a la mucina intestinal. Dado que el modelo de daño-regeneración de las RILs de Sambucus afecta a las células del TAC sin afectar a las células madre secundarias y que las células de Paneth potenciarían los procesos de diferenciación celular, se podría afirmar que la SELfd es capaz de unirse a restos glucídicos afines permitiendo la vectorización activa del sistema a tejido inflamado. Por ello, la elaboración de micropartículas funcionalizadas con SELfd constituye una estrategia prometedora para la vectorización activa de fármacos por vía oral a tejido inflamado intestinal.